掃描電子顯微鏡（SEM）在生物樣品研究中廣泛應用，但為了在SEM中觀察生物樣品，需要對樣品進行適當的制備。以下是從冷凍切片到金屬涂覆的一般步驟，以便將生物樣品制備成SEM觀察所需的樣品：

固定樣品： 首先，生物樣品需要進行固定以保持其結構和形態。常用的固定方法包括使用蛋白質交聯劑（如戊二醛）或化學固定劑。

冷凍切片： 將固定的生物樣品切割成薄片，通常采用超薄切片技術。這可以通過冷凍切片機將樣品冷凍并切成非常薄的切片，以保留其內部結構。

脫水： 從冷凍切片中去除水分，常用的方法是將樣品在低溫下暴露在低壓下，以使水分逐漸升華，而不是通過液體蒸發。

金屬涂覆： 生物樣品通常不導電，而SEM需要樣品表面具有導電性。因此，在觀察之前，需要在樣品表面涂覆一層薄金屬層，通常使用金屬蒸發或濺射技術。

金屬蒸發： 在真空條件下，將金屬（如金或鉑）加熱至其熔點，使其蒸發并沉積在樣品表面，形成一層薄金屬涂層。

金屬濺射： 使用離子束或電子束將金屬靶材濺射到樣品表面，也能產生薄金屬層。

觀察： 經過金屬涂覆后，生物樣品已準備好在SEM中進行觀察。通過在SEM中照射樣品表面，收集反射電子或二次電子來生成顯微圖像。

這些步驟是一般的生物樣品制備過程，但需要根據實際情況進行微調和優化。制備的關鍵是保持樣品的結構、形態和細節，同時確保樣品表面具有適當的導電性。在每個步驟中，控制實驗條件和儀器參數非常重要，以獲得高質量的SEM圖像。

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